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技術(shù)文章 / article
鑒別ATCC細(xì)胞株真?zhèn)蔚姆椒?/h1>
原載自：www.zhongkai58.com[技術(shù)資料頻道] 2017-10-24 瀏覽次數(shù)：2661
ATCC細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為ATCC細(xì)胞株，也就是說，ATCC細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。ATCC細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限， 可稱為有限細(xì)胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)， 則稱為連續(xù)細(xì)胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。 所以ATCC細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。ATCC細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長(zhǎng)穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
鑒別ATCC細(xì)胞株真?zhèn)蔚姆椒ǎ?/div>
一．利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別ATCC細(xì)胞株是否檢測(cè)目的抗原，方法如下：
(1) 將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody: antigen≈1:2的混合孵育液(2) 37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體(3) 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物(4) 實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是非目的抗原，該試劑盒為偽劣假造ATCC細(xì)胞株。 (5) 如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性，則說明試劑盒檢測(cè)抗體已被目的抗原中和或干擾，影響了其實(shí)際試劑盒抗體的檢測(cè)作用，則該試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是目的抗原。
二． 如果購(gòu)買了兩盒同一公司的ATCC細(xì)胞株A和B，利用交叉實(shí)驗(yàn)即可辨別ATCC細(xì)胞株是否造假，方法如下：
(1) 取出購(gòu)買的試劑盒A的包被板兩條。
(2) 一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(3) 另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(4) 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物。
(5) 實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說明兩個(gè)ATCC細(xì)胞株檢測(cè)的同一個(gè)指標(biāo)而非A和B，即該試劑盒為偽劣假造ATCC細(xì)胞株。
(6) 如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說明兩個(gè)ATCC細(xì)胞株檢測(cè)的不同指標(biāo)，試劑盒A只能檢測(cè)A，不能檢測(cè)B，即該試劑盒為正常的ATCC細(xì)胞株。
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